Ixzi.ru

Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

Определение содержания гемоглобина методом Сали

Содержание гемоглобинакрови в нормеу взрослых: у мужчин 130-160 г/л; у женщин 120-140 г/л. Суточные вариации содержания гемоглобина в периферической крови достигают 15% с максимумом по утрам. У жителей северных регионов и высокогорных районов уровень гемоглобина нередко оказывается выше приведенных значений на 10 г/л. У пожилых людей (старше 65 лет) нижняя граница нормы показателя достигает 122 г/л у мужчин и 110 г/л у женщин.Гемометр Сали представляет собой штатив и состоит из 3 пробирок одинакового диаметра. Одна (средняя) пробирка – пустая, две другие запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски. Интенсивность окраски стандарта соответствует идеальной норме – содержанию гемоглобина 166,7 г/л (16,67 г%).

ЦЕЛЬ: освоить определение содержания гемоглобина по методу Сали.

ОСНАЩЕНИЕ:гемометр Сали; 0,1Н раствор хлористоводородной кислоты; дистиллированная вода, капилляр (0,02 мл) стеклянная палочка.

ХОД РАБОТЫ: В свободную градуированную пробирку до нижней кольцевой метки налейте 0,1 Н раствор хлористоводородной кислоты. Специальным капилляром наберите 0,02 мл крови и осторожно выпускайте в пробирку под слой кислоты так, чтобы верхний слой остался неокрашенным. Содержимое пробирки перемешайте и оставьте на 5-10 минут: это время для образования солянокислого гематина коричневого цвета. Затем полученный раствор хлорида гематина темно-коричневого цвета разведите водой до цвета стандарта: по каплям добавляйте дистилированную воду, каждый раз перемешивая стеклянной палочкой. Как только цвет исследуемой жидкости полностью сравняется с цветом стандартов в гемометре Сали, отметьте, какому делению шкалы градуированной контрольной пробирки соответствует нижний мениск жидкости: это и будет искомое количество гемоглобина. Пробирка градуирована в г%, поэтому для перевода значения в г/л полученную цифру нужно умножить на 10. Гемометр Сали. 1 – запаянные пробирки со стандартной жидкостью; 2 – градуированная пробирка; 3 – капилляр с меткой 0,02 мл.

Определите концентрацию гемоглобина в образце крови, предлагаемой для исследования;

сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативам.

3. Расчёт цветового показателя.

Цветовым показателем (ЦП)называютусловную величину, характеризующую степень насыщения гемоглобином каждого эритроцита. Этот показатель можно вычислить, зная содержание гемоглобина в исследуемой крови и количество эритроцитов в 1 мкл этой же крови.

ЦП = Нв (г/л) * 3 / (три первых цифры от числа эритроцитов)

В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,15 – нормохромазия.

Превышение ЦП верхнего предела нормы называют гиперхромазией, уменьшение за предел нижнего уровня нормы – гипохромазией.

ХОД РАБОТЫ:определив в исследуемой крови содержание гемоглобина и эритроцитов в 1 л крови, рассчитайте цветовой показатель, сопоставьте с показателями нормы.

4. Подсчёт лейкоцитов в камере Горяева.

Камера Горяева должна быть сухой и чистой. К ней притирают покровное стекло до появления радужных полос. В смеситель (меланжер) для лейкоцитов (белая палочка в шарообразном расширении) до нижней метки “0,5” набирают кровь, а затем до метки “11” за шарообразным расширением 5% раствор уксусной кислоты, которая разрушает оболочки лейкоцитов (в камере подсчитывают их ядра), а кровь в меланжере разводится в 20 раз. Лейкоциты считаютв 100 больших квадратахсогласно правилу Егорова.Подсчёт производят по формуле:

Л=В*250*20*10^ 6 /100

где Л – количество лейкоцитов в 1 л крови; В – сумма лейкоцитов в 100 больших квадратов; 250 – множитель, приводящий к объёму крови 1 мкл (объём большого квадрата 1/250 мкл); 20 – разведение крови (кровь в меланжере разводится в 20 раз); 100 – число больших квадратов; 10^ 6 – количество мкл в одном литре.

В норме количество лейкоцитов 4-5 10 9 /л. Факторы, влияющие на количество лейкоцитов: возраст; время суток (нормальные биоритмы); приём пищи.

ГЕМОГЛОБИНОМЕТРИЯ

ГЕМОГЛОБИНОМЕТРИЯ (гемоглобин + греч, metreo измерять) — определение количества (концентрации) гемоглобина крови. В клин, лабораторной практике Г. проводится при исследовании больных, проф. осмотрах, экспертизе.

Существуют три основные группы методов Г.: колориметрические, газометрические и по содержанию железа в крови. Кроме того, имеется полуколичественный метод определения концентрации гемоглобина по удельному весу крови.

Колориметрические методы определения гемоглобина, разработанные в своей основе Велькером (H. Welcker), У. Говерсом, Г. Сали в 19 в., основаны на способности гемоглобина крови давать при хим. реакциях цветные производные — оксигемоглобин, карбоксигемоглобин, метгемоглобин, гемиглобинцианид, солянокислый гемин и т. д.

Существуют различные конструкции аппаратов, применяемых при этом методе Г.: от визуальных, типа компараторов и колориметров, до фотоэлектрометрических колориметров и фотометров (см. Колориметрия, Фотометрия, Спектрофотометрия). Ряд гемометров (Флейшля—Мишера, Бюркера, Аутенрита, «Мигос», «Цейсс-Икон», «Сикка») устарели. Для широкой практической работы в СССР выпускают гемометры ГС-З (гемометр Сали, вариант № 3; рис.), представляющие небольшой штатив из темной пластмассы с тремя смотровыми окошками. К прибору приложены пипетки, среди них точно отградуированная пипетка на 20 мкл для забора крови. В крайних гнездах стойки расположены запаянные пробирки со стандартным р-ром. В среднее гнездо штатива вставляется градуированная пробирка с пробой крови, разведенной децинормальной соляной к-той. Градуированная пробирка имеет две контрольные круговые метки: нижняя соответствует 0,2 мл, а верхняя — 2 мл. Шкала пробирки градуирована в грамм-процентах.

Первоначально количество гемоглобина было принято обозначать в так наз. единицах Сали, за 80 ед. была принята кровь с содержанием 5 ООО ООО эритроцитов в 1 мкл. Затем эти единицы стали выражать в процентах к норме. Но авторы разных типов гемометров принимали за 100% разные концентрации гемоглобина: от 14 до 17,3 г%. Поэтому величины процентного содержания гемоглобина были несопоставимыми. Осуществляется переход на выражение концентрации гемоглобина в грамм-процентах (г%) — количество гемоглобина в граммах в 100 мл крови. В СССР за 100% принято 16,7 г%. Т. о., 1 г% соответствует в процентном исчислении 6%.

Гемометры типа Сали требуют регулярной стандартизации и проверки, поскольку цвет стандартных р-ров со временем изменяется. Кроме того, оценка результатов отличается субъективностью, у разных исследователей расхождение показателей может достигать 15% и больше у одного и того же исследуемого.

Определение концентрации гемоглобина гемометром ГС-3 (Сали). Необходимые реактивы: децинормальный р-р соляной к-ты и дист, вода. Ход определения: капиллярной пипеткой гемометра — пипеткой Сали — насасывают выступающую из прокола кожи кровь до отметки 0,02 (20 мкл) и осторожно (чтобы не вспенить смесь) выдувают в градуированную пробирку гемометра с децинормальным р-ром соляной к-ты, предварительно налитой до нижней круговой метки; капилляр трижды осторожно промывают в смеси, содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой и пробирку вставляют в среднее гнездо гемометра между эталонами; выжидают 5 мин. При реакции гемоглобина с децинормальным р-ром соляной к-ты образуется солянокислый гемин, который имеет бурое окрашивание. Под визуальным контролем в пробирку добавляют дист, воду (пипеткой по каплям), перемешивая р-р стеклянной палочкой и сравнивая окраску р-ра солянокислого гемина в средней пробирке с цветом стандарта в ампулах. Когда окрашивание испытуемого р-ра совпадает по цвету со стандартами, пробирку извлекают из гнезда прибора, определяют по шкале пробирки уровень жидкости (по нижнему краю мениска р-ра), что соответствует концентрации гемоглобина.

Читать еще:  Питание при панкреатите заболевании поджелудочной железы

Определение концентрации гемоглобина фотоэлектрическим эритрогемометром (одновременно можно подсчитать количество эритроцитов). Метод основан на превращении гемоглобина крови в оксигемоглобин. Реактив для раз-, ведения крови содержит 1 г карбоната натрия в 1 л дист. воды. Ход определения: в пробирку с 5 мл реактива пипеткой от гемометра Сали вносят 40 мкл крови, осторожно перемешивают и выливают в кювету эритрогемометра. Измеряют степень поглощения р-ром гемоглобина волн определенной длины синей части спектра в соответствии с руководством к пользованию прибором. Шкала эритрогемометра составлена в грамм-процентах.

Определение концентрации гемоглобина фотоэлектроколориметром ФЭК-М или ФЭК-56 по Г. В. Дервизу и А. И. Воробьеву основано на превращении гемоглобина крови в оксигемоглобин, образующийся при гемолизе эритроцитов р-ром аммиака. Реактив: 0,024 н. (т. е. 0,04%) р-р аммиака. Ход определения: в пробирку с 4 мл 0,04% р-ра аммиака пипеткой Сали вносят 20 мкл крови с обычным трехкратным ополаскиванием ее. Пробирку встряхивают и выливают в кювету. Определение гемоглобина на ФЭК-М проводится при зеленом фильтре и в соответствии с правилами пользования прибором.

По величине экстинции (показатель оптической плотности) находят соответствующее значение концентрации гемоглобина в грамм-процентах. Калибровочная кривая составляется для каждого данного аппарата по стандартному р-ру гемоглобина.

Определение концентрации гемоглобина в колориметре «Линсон Юниор», приложенном к целлоскопу фирмы «АВ Ljung berd» (Швеция): гемоглобин из эритроцитов выделяется при гемолизе р-ром сапонина. Реактивы: р-р для разведения крови содержит 0,9% р-р хлорида натрия — 950 мл, фосфатный буфер М/15 pH 7,55 — 45 мл, 35% р-р нейтрального формалина — 5 мл; 2% р-р сапонина в 0,9% р-ре хлорида натрия. Р-р хранится в холодильнике не более двух дней.

Ход определения: в пробирку с 4 мл р-ра для разведения крови вносят 20 мкл крови, затем добавляют 0,1 мл р-ра сапонина, перемешивают, выливают в кювету прибора и фотометрируют. К прибору прилагается таблица, по к-рой показатель шкалы оптической плотности переводится в грамм-проценты.

Фотоэлектрические гемометры ГФ-1, ГФ-2 и ГФ-3 с проточными кюветами предназначены для массовых исследований в условиях лаборатории. Шкалы этих аппаратов калиброваны как для оксигемоглобинового, так и для гемиглобинцианидного метода.

Применение гемиглобинцианидного метода основано на превращении гемоглобина крови в гемиглобинцианид при добавлении к крови трансформирующего реактива, содержащего цианистые соединения. Реактив: 200 мг железосинеродистого калия, 50 мг цианида калия, 140 мг монофосфата калия и 0,5 мл Sterox Se (концентрированного) растворяют в дист, воде и доводят объем р-ра до 1 л: pH по pH-метру должен быть 7,0—7,4. Реактив длительное время может сохраняться в бутыли из темного стекла, желательно в холодильнике (при t° 4°). Можно применить и реактив, предложенный Драбкиным: железосинеродистый калий (красная кровяная соль) — 0,2 г, цианид калия — 0,05 г, бикарбонат натрия — 1 г, дист, вода — до 1 л.

Ход определения: в пробирку с 5 мл реактива вносят 20 мкл крови, хорошо смешивают и оставляют для образования гемиглобинцианида на 2—4 мин. (при работе с реактивом Драбкина, который имеет щелочную реакцию pH 8,6 и поэтому образование гемиглобинцианида идет медленно,— на 20 мин.). Затем переливают в кювету и определяют концентрацию гемоглобина на калиброванном фотоэлектроколориметре или спектрофотометре.

Применение р-ров цианметгемоглобина в колориметрическом Методе Г. признано Международным комитетом по стандартизации в гематологии наиболее точным и объективным методом Г. Указанный комитет выпускает эталонный долгохранящийся р-р гемиглобинцианида для стандартизации и постоянной проверки и калибровки гемометров.

В СССР выпускаются стандартные (эталонные) р-ры циансодержащего трансформирующего реактива по Драбкину. Раствор гемиглобин-цианида утвержден как унифицированный стандарт для определения концентрации гемоглобина в клинико-диагностических лабораториях.

Газометрические методы основаны на использовании свойства гемоглобина присоединять кислород или окись углерода в строго определенных объемах. Используют приборы Ван-Слайка, Баркрофта (см. Ван-Слайка методы).

Расчет концентрации гемоглобина по количеству железа в пробе крови. Количество железа в четырех геминовых группах молекулы гемоглобина составляет 0,347%, следовательно, по количеству железа можно установить содержание гемоглобина. Эта группа методов в клинических лабораториях не применяется.

Полуколичественный метод (купросульфатный) определения концентрации гемоглобина по удельному весу крови был разработан Ван-Слайком (D. D. Van Slyke). Сотрудники ЦОЛИПК применили этот метод для быстрого отбора доноров. Принцип метода основан на том, что удельный вес реактива выбирают соответственно пограничной концентрации гемоглобина, допустимой для отбора доноров: в зависимости от удельного веса капля крови всплывает или опускается на дно сосуда с реактивом, что свидетельствует об уменьшенной или нормальной концентрации гемоглобина в крови. Приготовление реактива: на 2 л дист, воды берут 500 г сульфата меди (чистый, для анализа); полученный р-р фильтруют через бумажный складчатый фильтр и затем, прибавляя небольшие количества дист, воды, доводят до удельного веса 1,052 под контролем урометра, поддерживая температуру р-ра и воды на уровне 20°. Ход определения: в стаканчик наливают раствор сульфата меди высотой 5 см. Чистой и сухой пастеровской пипеткой набирают кровь и с высоты 1 см над уровнем р-ра выпускают каплю в стаканчик. Сначала капля крови опускается на глубину 2—3 см. Если через 10—15 сек. она всплывает или остается взвешенной в толще р-ра, то концентрация гемоглобина крови ниже 12 г%, если погружается на дно р-ра,— выше 12 г%. Между последующими определениями должно пройти не менее 1 мин., в течение к-рой все капли оседают на дно.

Читать еще:  Ноющая боль в области сердца – что это может быть?

Нормальное содержание гемоглобина в крови: для женщин среднее значение 13,0 г%, колебания 12,0—14.0 г%; для мужчин среднее значение 14,5 г%, колебания 13,0—16.0 г%.

Библиография: Дeрвиз Г. В. Применение фотоэлектроколориметров (ФЭК-М и ФЭК-56) для цианметгемоглобинового метода’ определения концентрации гемоглобина в крови, Лаборат, дело, № 2, с, 67, 1973, библиогр.; К о р ж у e в П; А. Гемоглобин, М., 1964, библиогр.; Кушаковский М. С. Клинические формы повреждения гемоглобина, с. 25, Л., 1968; Соколов В. В. и Грибова И. А. Показатели периферической крови у здоровых людей, Лаборат, дело, № 5, с. 259, 1972; Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 5, М., 1975; Унифицированные методы клинических лабораторных исследований, под ред. В. В. Меншикова, в. 6, с. 103, М., 1974, библиогр.; Ярустовская JI. Э., Реутова М. Б. иЛипацА. А. Показатели периферической крови у здоровых людей, Пробл, гематол. и* перелив, крови, т. 14, № 2, с. 29, 1969, библиогр.; Antonini E. a. Brunori М. Hemoglobin, Ann. Rev. Biochem., v. 39, p. 977, 1970; S t o b b e H. Untersuchun-gen von Blut und Knochenmark, S. 177, B., 1968; Sunderman F. W. Status of clinical haemoglobinometry in the United States, в кн.: Standardization, documentation a. normal values in haematology, ed. by C. G. de Boroviczeny, p. 25, Basel — N. Y., 1965.

Лабораторная работа № 3.10. Определение количества гемоглобина

. Содержание гемоглобина в норме приведено в таблице 16.

Таблица 16 –Содержание гемоглобина в норме

Показатели Пол Система Среднее значение
г% г/л Ед. г% г/л
Гемоглобин (Hb) М 13,0 –16,0 130,0 -160,0 80-108 15,8
Ж 12,0 –15,0 120,0 -150,0 70-95 13,7

А). Гематиновый метод (метод Сали).

Цель работы: освоить калориметрический способ определения гемоглобина с помощью гемометра Сали.

Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета. В учебных целях используют гемометр Сали, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра (рис.18). Одна (средняя) пробирка – пустая и сверху открыта, две другие запаянные и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски.

Оборудование:гемометр Сали, 0,1 % раствор НСl, смеситель, стерильный скарификатор, пипетка, дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Рис. 18 Гемометр Сали

1 – пробирки со стандартным раствором;

2 – градуированная пробирка с исследуемой кровью;

5 – палочка для смешивания.

ХОД РАБОТЫ

1.В градуированную пробирку гемометра Сали налить 0,1 % раствор соляной кислоты до нижней круговой метки – 0,2 мл.

2.Приготовить смеситель к забору крови (на тупой конец надеть резину, промыть водой и продуть).

3.Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть палец

4.Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать крови до метки 0,2 мл.

5.Смеситель погрузить в градуированную пробирку гемометра и выдуть из нее кровь на дно пробирки.

6.Смеситель промыть 2-3 раза 0,1% раствором соляной кислоты из верхнего прозрачного слоя.

7.Содержимое пробирки тщательно перемешать, ударяя пальцем по ее концу и помешивать палочкой, а потом оставить на 5 минут.

8.В пробирку с раствором, размешивая палочкой, по каплям внести дистиллированную воду до полного совпадения цвета жидкости в градуированной пробирке с цветом стандарта.

9.Показания гемометра снять по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке.

Градуированная пробирка гемометра имеет две шкалы, нанесенные с обеих сторон. Одна шкала (с делениями от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, грамм-процент (г%) гемоглобина. Вторая шкала (с делениями от 12 до 140) показывает единицы гемометра (или относительный процент гемоглобина), при этом 100 единиц (или 100% по гемометру Сали) означают, что в 100 мл крови содержится 16,67 г гемоглобина, или 100 единиц соответствует 16,67 г%.

10. Вычисление концентрации гемоглобина по формулам в г%, % и г/л

Пример 1. Равенство красок достигнуто на отметке 15 г% гемоглобина. Для расчета концентрации Hb в относительных процентах применяется формула:

Формула для расчета: Х = (100 % х 15 г%)/16,7 г%,

где Х – относительное содержание гемоглобина, %.

16,7 – стандартная концентрация Hb в г%.

Пример 2. Равенство красок достигнуто на отметке 80. Следовательно, исследуемая кровь содержит 80 % гемоглобина по сравнению со стандартом (16,7 г%)

Формула для расчета: Х = (16,7 г% х 80 %)/100 %,

где Х – количество гемоглобина в г%

Для того чтобы выразить концентрацию гемоглобина в граммах на литр (г/л), нужно количество гемоглобина в г% умножить на 10.

Пример 3. Гемоглобин – 13,5г% = 13,5 х 10 = 135 г/л.

Грамм процентное обозначение гемоглобина имеет преимущества перед обозначением просто в единицах, так как оно дает реальную количественную величину концентрации гемоглобина.

Оформление протокола

1. Определите концентрацию гемоглобина.

2. Занесите данные в таблицу 17

Таблица 17. –Собственные результаты исследований

Пол Содержание гемоглобина в крови
Полученные результаты Норма
В грамм процентах (г%)
Мужчины 13,0 –16,0
Женщины 12,0 –15,0
В грамм на литр г/л
Мужчины 130,0 -160,0
Женщины 120,0 -150,0
В относительных процентах
Мужчины
Женщины
  1. Сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативным.

Б).Гемоглобинцианидный метод(сиспользованием фотометрического гемоглобинометра АГФ – 03/540 – «Минигем».

Оборудование:гемоглобинометр АГФ – 03/540 – «Минигем», трансформирующий раствор,стерильный скарификатор, гемоглобиновый капилляр (0.02 мл), пипетка с грушей (5мл), дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

1.Проверить оптический ноль прибора (в соответствии с техническим паспортом прибора).

2.Подготовить пробирки с трансформирующим раствором в объеме -5 мл.

3. Произвести забор капиллярной крови в гемоглобиновый капилляр и перенести в пробирки с трансформирующим раствором.

Читать еще:  Трикуспидальная регургитация у плода что это такое

4. Тщательно перемешать стеклянной палочкой.

5.Через 20 мин. провести замер пробы, для чего перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки и установить кювету в фотометрическую ячейку прибора.

6.Появление звукового сигнала свидетельствует о фотометрировании и на индикаторе появляется число, соответствующее концентрации гемоглобина (в гр./л).

7. Вылить содержимое кюветы, удалить оставшиеся капли с верхнего края кюветы при помощи бинта и перейти к очередному замеру.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения:

1.Строение молекулы гемоглобина

2.Строение молекулы миоглобина.

3.Соединения гемоглобина с различными газами и их значение.

6.Как определить содержание гемоглобина в крови.

7.Типы гемоглобина у эмбриона, плода, новорожденного и детей раннего возраста.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ – конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Папиллярные узоры пальцев рук – маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Как определить концентрацию гемоглобина методом сали

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА КРОВИ, ПОЛУЧЕНЫХ РАЗНЫМИ МЕТОДАМИ

Чибескова Мария Витальевна

студент 32 группы отделения «Лабораторная диагностика» ГБОУ СПО «ММУ № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Меклер Наталия Николаевна

канд. биол. наук, Доцент, преподаватель дисциплин профессионального модуля ГБОУ СПО «ММУ № 4 ДЗМ», РФ, г. Москва

Общий анализ крови считается одним из самых доступных, простых и информативных методов исследования, которые применяются у людей любого возраста, начиная с момента рождения. В медицинской терминологии это исследование называют клиническим анализом крови.

Основной индекс клинического анализа крови — содержание гемоглобина. До сих пор его определение является одним из наиболее важных и массовых показателей, так как играет важнейшую роль в диагностике большого числа заболеваний связанных с нарушениями в иммунной системе и нарушением всасывания железа в желудочно-кишечном тракте. Следует отметить, что значения гемоглобина очень важно и при диагностике ранних стадий многих тяжелых заболеваний, таких как сахарный диабет, доброкачественные и злокачественные новообразования в печени, почках, центральной нервной системе.

В настоящее время существует много методов определения концентрации гемоглобина. Колориметрические методы, принцип которых заключается в изменении цвета производных гемоглобина: солянокислого гематина, карбоксигемоглобина, цианметгемоглобина. Газометрические методы, позволяют судить о содержании гемоглобина по количеству газа, которым насыщают гемоглобин, например кислород или окись углерода. Методы, основанные на определении железа в гемоглобиновой молекуле. Так как гемоглобин содержит строго определенное количество железа (0,374 %), то по его содержанию устанавливают и количество гемоглобина [4, с. 243—247].

Для рутинных исследований содержания гемоглобина сегодня предпочитают колориметрические методы как наиболее дешевые, простые и быстрые в использовании. Наиболее распространенным является гемоглобинцианидный метод, проводимый на гемометрах разного типа. В ряде лабораторий до сих пор применяют «старый» метод Сали [3, с. 340—343].

В связи с этим мы поставили перед собой цель: сравнить результаты, полученные при исследовании проб крови на содержание гемоглобина (n=3) по методу Сали и гемоглобинцианидным методом на гемометре «МиниГЕМ-540».

Из указанной цели были определены задачи:

1. Изучить роль гемоглобина в организме человека;

2. Освоить колориметрический и гемоглобинцианидный метод исследования содержания гемоглобина в крови человека;

3. Провести исследование проб крови на содержание гемоглобина заявленными методами;

4. Обработать полученные результаты и сделать выводы.

Начиная работу, мы выдвинули гипотезу: результаты исследования содержания гемоглобина гемоглобинцианидным методом на анализаторе дает более точные результаты, чем полученные при исследовании традиционным методом на приборе Сали.

Объектом исследования явилась венозная кровь.

Предметом исследования — содержание гемоглобина в ней.

Материалы и методы исследования .

Исследования проводились в условиях клинико-диагностической лаборатории «ГКБ №7 ДЗМ». Материалом для эксперимента стали пробы венозной крови с антикоагулянтом ЭДТА, поступившие в лабораторию 17 марта 2014 года из 16-го гинекологического отделения указанного лечебного учреждения. Нами были отобраны пробы больных разного возраста: 27, 52 и 75 лет. Каждую пробу крови мы оценивали двумя способами: гемоглобинцианидным используя гемометр «МиниГЕМ-540 и гемометр Сали. Полученные результаты сравнивали с результатами, полученными в условиях лаборатории на геатологическом анализаторе Becman Culter ActDif. Таким образом было проведенно 6 самостоятельных исследований и сделан сравнительный анализ.

Гемоглобин представляет собой кровяной пигмент, роль которого заключается в транспорте кислорода к органам и тканям, транспорте двуокиси углерода от тканей к легким, кроме этого он является внутриклеточным буфером, который поддерживает оптимальную для метаболизма pH. Химически гемоглобин относится к группе хромопротеидов. Его простетическая группа, включающая железо, называется гемом, белковый компонент — глобином (молекула гемоглобина содержит 4 гема и 1 глобин). Существуют физиологические и патологические виды гемоглобина. К физиологическим гемоглобинам относятся НЬА (гемоглобин взрослого) и HbF (фетальный гемоглобин, составляющий основную массу гемоглобина плода и исчезающий почти полностью ко 2-му году жизни ребенка). Патологические гемоглобины возникают в результате врожденного, передаваемого по наследству дефекта образования гемоглобина и являются основой развития гемоглобинопатий, относимых к «молекулярным болезням». Нормальные величины содержания гемоглобина : у мужчин 130—160 г/л; у женщин; 120—140 г/л [2, с. 160—172; 1, с. 45—46].

Принцип метода Сали: от прибавления к крови соляной кислоты гемоглобин превращается в хлоргемин (солянокислый гематин) коричневого цвета, интенсивность которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Полученный раствор солянокислого гематина разводят водой до цвета стандарта, соответствующего известной концентрации гемоглобина. Определение проводят в упрощенном колориметре — гемометре Сали.

Принцип гемоглобинцианидного фотометрического метода: кровь смешивают с реактивом, превращающим гемоглобин в цианметгемоглобин, концентрацию которого измеряют фотометрически. В качестве реактива употребляют раствор Драбкина, под влиянием железосинеродистого калия гемоглобин окисляется до метгемоглобина (гемиглобина), который затем превращается при помощи цианида калия в цианметгемоглобин (гемиглобинцианид). Через 20 минут измеряют экстинцию при длине волны 540 нм и толщине слоя 1 см на различных фотоэлектроколориметрах.

Результаты исследования показали следующее. Факт содержания гемоглобина крови определенного «старым» методом представлен в таблице 1.

Содержание гемоглобина в крови определенного по методу Сали

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector